Evaluación de proteínas recombinantes del nematodo Strongyloides stercoralis en el control de la parasitosis y su efecto inmunomodulador

La estrongiloidosis es una enfermedad tropical desatendida que afecta a millones de personas en el mundo. En España no es considerada una enfermedad endémica, pero su diagnóstico y vigilancia es importante debido a la presencia de casos (autóctonos e importados) que pueden producir síndrome de hiperinfección en pacientes inmunosuprimidos. Hasta el momento, no existe una técnica de elección para el diagnóstico de la estrongiloidosis. Las técnicas parasitológicas, tanto las tradicionales como las moleculares, detectan la presencia del parásito en las muestras biológicas, lo cual no siempre ocurre en infecciones crónicas. Las técnicas serológicas resultan más sensibles, pero menos específicas, dificultando el diagnóstico en los casos de coinfecciones parasitarias, presentando limitaciones y dificultades con las que se encuentran los programas de control en zonas endémicas. La presente Tesis busca ampliar el conocimiento sobre la posibilidad de utilizar proteínas recombinantes de la larva L3i de Strongyloides stercoralis en el diagnóstico, así como analizar su posible efecto modulador de la respuesta inmunitaria. Se produjeron las proteínas recombinantes 14-3-3 zeta (rSs14-3-3z), Ferritina (rSsFe) y Antígeno Principal o Major Antigen (rSsMA) de S. stercoralis, en Escherichia coli. Dichas proteínas fueron evaluadas para su posible utilidad diagnóstica en un ensayo inmunoenzimático ELISA indirecto utilizando sueros de pacientes de estrongiloidosis. Los resultados obtenidos mostraron que la proteína rSs14-3-3z proporcionó los mejores resultados diagnósticos en cuanto a sensibilidad y con mayor especificidad que la presentada por los ensayos comerciales disponibles. Para analizar el efecto modulador de la respuesta inmunitaria, se realizaron ensayos in vitro con dichas proteínas recombinantes, utilizando cultivos de células derivadas de macrófagos murinos (Raw BlueTM), y se evaluaron los posibles efectos citostáticos/citotóxicos, pro- o antiinflamatorios, y la polarización de la respuesta inmunitaria. Las células tratadas con rSs14-3-3z mostraron un perfil de citoquinas Th2/Th17, mientras que las tratadas con rSsMA mostraron un perfil Th2/Treg. A partir de los datos obtenidos in vitro, se diseñó y llevó a cabo un ensayo de inmunización con las proteínas rSs14-3-3z y rSsMA en un modelo experimental de ratón, para evaluar el nivel de protección frente a la infección por el parásito múrido S. venezuelensis. La inmunización con rSs14-3-3z y rSsMA no previno la infección, pero sí que produjo un efecto modulador de la respuesta inmunitaria. La proteína rSs14-3-3z, que parece favorecer el establecimiento y el desarrollo de las hembras parásitas, elicitó una respuesta Th2/Treg en los bazos de ratones inmunizados y una elevada producción de TNF-, confirmando su papel inmunomodulador.